· polyakryyliamidiGeelin on akryyliamidimonomeerin, polymeroinnin lähtöaineisto, katalyytti ja suola- ja puskuriseoksen oikea.
· akryyliamidija bis (n, n '- metyleeni kaksoisakryliamidi) on monomeerimuoto geelimatriisi.
· Ammoniumpersulfaatti Start -liimapolymerointiprosessi. Liiman formulaatio vaatii 10% ammoniumpersulfaattiliuosta, joka on valmistettu veteen. Suurin osa tiedoista osoitti aktiivisen käytön tarpeen. 10%: n liuos voidaan kuitenkin sijoittaa 4 ℃: een useita viikkoja ilman merkittävää aktiivisuuden menetystä. Make 10 ml ja hävitä, kun liima ei aggregoitu.
Vinkki: prosenttiosuusakryyliamidiSekvensoinnissa liima ja proteiiniliima ei ole sama. Jos käytät Premade -akryyliamidia: BIS -ratkaisu, varmista, että saat oikean pullon.
· Temed (n, n, n ', n'- tetrametyylietyleenidiamiini) on katalyytti ruskeassa pullossa, joka on asetettu jääkaappiin. Lisää juuri ennen liiman kaatamista.
· Polyakryyliamidielektroforeesi käytetty lasi elektroforeesissa tulisi pestä ennen jokaista ja sen jälkeen. Pese elektroforeesin jälkeen pehmeällä harjalla ja kankaalla kuumassa saippuavedessä, huuhtele tislatulla vedellä ja seiso kuivua.
· Kosteus ja pöly voivat aiheuttaa ontolla polymeerillä. Puhdista lasilevy ennen elektroforeesia lasilevyllä ja pyyhi se pehmeällä harjalla. Pese tislatulla vedellä ja kuivaa huolellisesti paperipyyhkeellä. Huuhtelu 70 -prosenttisella etanolilla ennen paperilla pyyhkiä auttaa puhdistamaan ja nopeuttamaan kuivausta. Lisää näytteitä akryyliamidista peräkkäin: bis, vesi, puskuriliuos, ammoniumpersulfaatti, temed. Ravista hyvin ja kaada heti.
Polyakryyliamidia ei tarvitse kaatamaan ennen polymerointia. (Akryyliamidi asetettiin tyhjiöön kuplien poistamiseksi, koska happi estää polymerointia.)
Vaaka liimapisteen näytteen kärjet.
· Laita pala mustaa paperia alareunaan, musta tausta, jotta näyteaukoa voidaan nähdä selkeämmin.
· Liima säiliön täytetty puskuri, vain kolloidin yli.
· Jos reunalla on valo, kytke valot päälle, anna valon paistaa kolloidia. Piirrä näyte pipettiin.
· Automaattisen pipetuslaitteen käyttäminen.
· 10-200 MU 1: n nestemäisessä liikkumispisteessä voidaan käyttää useimmissa näytteen pisteissä. Hyvin pienille näytteenreiteille (alle 10 μ1) sekvensointiliitoihin käytetty pitkä pipettipää on helpompaa.
· Pippetting vain upotettu näytteeseen hengittäen hitaasti liikkuvaa nestettä. Näyte voi näyttää tarttuvalta glyseriinillä, ja nopea pumppaus voi vetää ilmakuplia pipettipäähän.
· Näytteet pipetointipään hengittämisen jälkeen liikuttavat nestepäätä varovasti putken reunalla tai pyyhkimällä paperia imevät nestemäisen pään pisaroiden ulkopuolelle. Ole varovainen, ettet imeä näytettä.
Aseta näyte näytteen reikään
· Pippett -laite pienen paineen pitämiseksi saa näytteitä liikuttamaan hieman ylivuotoon nestemäistä päätä.
· Pippettinpää asetettu puskuriin, hieman korkeampi kuin spot -reiät, ylläpitää positiivista painetta. Pipetin kärki voidaan asettaa pieneen reikään.
· Näytteet hitaasti ja tasaisesti. Pipetin kärki asetetaan pistinäytteen reikän yläpuolelle ja näyte uppoaa reikään. Anna näytteen uppoaa täyttääksesi näytteen reiän työntämisen sijasta.
· Kun viimeinen näytteen pudotus nestemäisellä pään kanssa, neste siirtyy toiseen jalkaan, nosta hitaasti nestettä, siirry puskurista
Kuinka tehdä pystysuora liimanäytteenotto?
· Pystysuora liimapisteenäytteen reikiä, jotka muodostuvat kahden lasikappaleen väliin. Hyvin ohuessa liimassa pipettipäätä ei voida edes asettaa kahden lasilevyn väliin. Katso glyseriini! Laita pipettipää näytteen reiän yli ja näyte uppoaa reikään.
· Pointinäyte ennen, muista laittaa polypropeeniasyyligeelinäytteen reikän pystysuuntainen piste puhtaaksi. Pese polymeroimaton akryyliamidi ja vesi, joka voi näkyä näytteen reikän pohjassa. Vesi voi tehdä näytteen reikästä huomattavasti pienemmän. Käytä 25 ml: n tai 50 ml: n ruiskua ja 18-mittaista neulaa. Kaada elektroforeesipuskuriin ja huuhtele näytereikä varovasti.
· Näyteaukoa voi olla vaikea nähdä, mutta loput ovat helppoja. Jos reikiä on ylimääräisiä, näytepuskuri voidaan testata bromofenolisillä.
Viestin aika: Mar-31-2023