· polyakryyliamidigeeli on akryyliamidimonomeeri, polymeroinnin lähtöaine, katalyytti ja oikea suola ja puskuriseos yhdessä.
· akryyliamidija BIS (N,N'-metyleenikaksoisakryyliamidi) on monomeerimuodossa oleva geelimatriisi.
· Ammoniumpersulfaatti aloittaa liimapolymerointiprosessin.Liiman formulointi vaatii 10 % ammoniumpersulfaattiliuosta, joka on valmistettu veteen.Suurin osa tiedoista osoitti aktiivisen käytön tarvetta.10-prosenttinen liuos voidaan kuitenkin asettaa 4 ℃:seen useiksi viikoiksi ilman merkittävää aktiivisuuden menetystä.Täytetään 10 ml:aan ja hävitä, kun liima ei aggregoitu.
Vinkki: prosenttiosuusakryyliamidisekvensoinnissa liima ja proteiiniliima eivät ole sama asia.Jos käytät esivalmistettua akryyliamidi: BIS-liuosta, varmista, että hankit oikean pullon.
· TEMED (N,N,N',N'-tetrametyylietyleenidiamiini) on katalyytti ruskeassa pullossa, joka laitetaan jääkaappiin.Lisää juuri ennen liiman kaatamista.
· polyakryyliamidielektroforeesi elektroforeesissa käytetty lasi tulee pestä ennen ja jälkeen joka kerta.Pese elektroforeesin jälkeen pehmeällä harjalla ja liinalla kuumassa saippuavedessä, huuhtele tislatulla vedellä ja anna kuivua.
· ontto polymeeri voi aiheuttaa kosteutta ja pölyä.Ennen elektroforeesia puhdista lasilevy lasinpuhdistusaineella ja pyyhi se pehmeällä harjalla.Pese tislatulla vedellä ja kuivaa huolellisesti paperipyyhkeellä.Huuhtelu 70 % etanolilla ennen paperilla pyyhkimistä auttaa puhdistamaan ja nopeuttamaan kuivumista.Lisää akryyliamidinäytteet peräkkäin: BIS, vesi, puskuriliuos, ammoniumpersulfaatti, TEMED.Ravista hyvin ja kaada välittömästi.
Polyakryyliamidista ei tarvitse poistaa kaasua ennen polymerointia.(Akryyliamidi sijoitettiin ennen tyhjiöön kuplien poistamiseksi, koska happi estää polymerisaatiota.)
Vaakasuuntaiset liimapisteen näytekärjet.
· laita pala mustaa paperia pohjalaatikkoon, musta tausta tehdäksesi näytereiän nähdäksesi paremmin.
· Liimasäiliöllä täytetty puskuri, juuri kolloidin päällä.
· jos reunassa on valo, laita valot päälle, anna valon loistaa kolloidisesti.Vedä näyte pipettiin.
· käyttämällä automaattista pipetointilaitetta.
· 10-200 mu:ssa 1 nesteen liikkumispistettä voidaan käyttää useimmissa näytteen pisteissä.Hyvin pienille näytereikille (alle 10μ1) liiman sekvensointiin käytettävä pitkä pipetin pää on kätevämpi.
· pipetointi juuri upotettuna näytteeseen, hitaasti liikkuvan nesteen hengittäminen.Näyte voi näyttää tahmealta glyseriinin kanssa, ja nopea pumppaus voi vetää ilmakuplia pipetin päähän.
· näytteet pipetointipään hengittämisen jälkeen liikuttavat nestepäätä varovasti putken reunalla tai pyyhkimispaperi imevät nestepäätä pisaroiden ulkopuolelle.Varo imemästä näytettä.
Aseta näyte näyteaukkoon
· Pipetointilaite pitämään pientä painetta, saa näytteet hieman liikuttamaan ylivuotonesteen päätä.
· puskuriin asetettu pipetointipää, hieman pistereikiä korkeammalla, ylläpitää positiivista painetta.Pipetin kärki voidaan työntää pieneen reikään.
· hitaasti ja tasaisesti näytteet ulos.Pipetin kärki asetetaan pistenäytteen reiän yläpuolelle, ja näyte uppoaa reikään.Anna näytteen upota täyttääkseen näytereiän sisään työntämisen sijaan.
· kun viimeinen pisara näytettä nestepäällä, neste siirtyy toiseen jalkaan, nostaa nestettä hitaasti, siirtyy puskurista
Kuinka tehdä pystysuora liimanäytteenotto?
· pystysuorat liimauspisteen näytereiät kahden lasipalan väliin.Hyvin ohuessa liimassa pipetin päätä ei voi laittaa edes kahden lasilevyn väliin.Katso glyseriiniä!Aseta pipetin pää näytereiän päälle ja näyte uppoaa reikään.
· kohta näyte ennen, muista laittaa pystysuora pisteen polypropeeni asyyli geeli näyte reikä huuhdellaan puhtaaksi.Pese pois polymeroimaton akryyliamidi ja vesi, joka saattaa ilmestyä näytereiän pohjalle.Vesi voi pienentää näytereikää huomattavasti.Käytä 25 ml tai 50 ml ruiskua ja 18 gaugen neulaa.Kaada elektroforeesipuskuri ja huuhtele näyteaukko varovasti.
· näyteaukon näkeminen voi olla vaikeaa, mutta samalla loppu on helppoa.Jos reikiä on liikaa, näytepuskuri voidaan testata bromifenolisinisellä.
Postitusaika: 31.3.2023